siRNA下调Trop2基因表达对肺腺癌H460细胞增殖及侵袭能力的影响

【摘要】目的：运用siRNA(小分子干扰RNA)技术构建靶向抑制滋养层细胞表面蛋白2（Trop2）基因的重组腺病毒质粒表达载体，观察其对肺腺癌H460细胞的Trop2基因表达及对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法：运用siRNA技术构建靶向抑制Trop2基因的重组腺病毒质粒表达载体并转染肺腺癌H460细胞株，优化转染条件，荧光倒置显微镜下观察转染效率；实验分三组，Ctrl组、rAd5-siCtrl转染组、rAd5-siTrop2组。应用实时荧光定量PCR及Westernlotting检测转染后目的基因mRNA及蛋白的表达水平，并用Westernblotting检测目的基因被沉默后细胞周期蛋白D1（CyclinD1）及p-ERK-1蛋白的表达情况。分别采用MTT增殖实验、Transwelld小室实验检测各组差异，观察沉默肺腺癌H460细胞的Trop2基因表达对其细胞增殖及侵袭能力影响。结果：靶向抑制Trop2基因的重组腺病毒质粒表达载体构建成功，荧光倒置显微镜下观察转染率达85%以上。重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siTrop2介导的靶向Trop2siRNA可以有效下调目的基因的mRNA及蛋白表达；同时CyclinD1及p-ERK-1蛋白的表达的表达亦下调。MTT增殖实验、Transwell小室实验检测显示肺腺癌H460细胞增殖及侵袭能力明显降低。结论：通过siRNA技术构建的靶向Trop2基因的重组腺病毒质粒表达载体可以抑制肺腺癌H460细胞的Trop2的表达，抑制其体外增殖及侵袭能力。其抑制H460细胞体外增殖的机制可能与调控Raf/MEK/ERK通路有关。
【作者】高小燕；
【导师】朱晔涵；
【作者基本信息】苏州大学，呼吸病学，2014，硕士
【关键词】滋养层细胞表面蛋白-2；肺腺癌；小分子干扰；RNA；

【参考文献】
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